Biotecnologia Atividade Inventiva
TBR3406/17 Pedido trata de sondas para detecção de ácido nucléico, que compreendem um par de oligonucleotídeos complementares rotulados de fluoróforos/ extintores, um dos quais é mais curto do que o outro, são capazes de detectar alvos de filamento único e de filamento duplo em reações de hibridização e reações de amplificações com detecção em tempo real. As sondas de filamento duplo de igual comprimento são úteis nas reações de amplificação de PCR com detecção em tempo real. D1 revela sonda fita dupla na qual uma das fitas compreende um ligante (que pode ser um emissor de fluorescência) e a outra fita compreende um anti-ligante (que pode ser um extintor de fluorescência - quencher). Porém, D1 não revela sonda fita dupla formada por fitas de diferentes tamanhos, útil para a discriminação de alelos com uma única base não pareada. Desta forma D1 não é considerado prejudicial à patenteabilidade da presente matéria. Assim sendo, as sondas dupla fita do presente pedido são consideradas vantajosas em relação às sondas dupla fita do estado da técnica devido à diferença de tamanho específica entre as duas fitas, que é de 1 a 10 nucleotídeos. Isso porque (i) se os tamanhos das duas fitas forem iguais, não há nenhuma motivação biológica para que ocorra o deslocamento de uma das fitas da sonda em prol do pareamento com o alvo perfeitamente combinado, tendo em vista que a ligação entre as duas fitas da sonda é perfeitamente estável e (ii) se a diferença de tamanho entre as duas fitas for muito grande (maior do que 10 nucleotídeos) haverá maior afinidade da região fita simples da sonda com o alvo, permitindo o pareamento imperfeito com alvo contendo um único nucleotídeo não pareado (ou mais) e dificultando a discriminação entre alelos.
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